產(chǎn)品詳情介紹
p24是HIV病毒顆粒中高度保守的、含量最多的主要結(jié)構(gòu)蛋白，是結(jié)構(gòu)基因gag編碼的產(chǎn)物，在病毒的包裝和成熟過程中起到關(guān)鍵作用。慢病毒載體則是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而生成的病毒載體系統(tǒng)，可以高效地將目的基因轉(zhuǎn)入到細(xì)胞中。p24 蛋白的含量代表著慢病毒的顆粒數(shù)，因此，可通過ELISA方法檢測(cè)p24含量來測(cè)定慢病毒的物理滴度。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法定量測(cè)定慢病毒上清中HIV-p24含量。本試劑盒采用高親和力的HIV-p24抗體預(yù)包被酶標(biāo)板，將病毒裂解液和標(biāo)準(zhǔn)品/待測(cè)樣本加入微板孔中，經(jīng)過孵育后樣本中存在的HIV-p24會(huì)與酶標(biāo)板上的預(yù)包被抗體特異性結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合物后，將生物素標(biāo)記的HIV-p24檢測(cè)抗體加入微板孔中，再次孵育后檢測(cè)抗體會(huì)與錨定在酶標(biāo)板上的HIV-p24特異性結(jié)合。隨后，將辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)加至微孔板中并孵育，通過檢測(cè)抗體上的生物素和鏈霉親和素發(fā)生的高強(qiáng)度非共價(jià)結(jié)合，形成“包被抗體- HIV-p24蛋白-檢測(cè)抗體-Streptavidin-HRP”免疫復(fù)合物。再次洗滌后，將顯色底物TMB加至微板孔中，HRP會(huì)催化TMB底物生成藍(lán)色產(chǎn)物，顏色反應(yīng)的深淺將與樣本中HIV-p24的濃度成正相關(guān)。而后加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng)570-630 nm)處測(cè)定吸光度值。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，由樣本吸光度值可計(jì)算出樣本中所含HIV-p24濃度。本試劑盒特異性強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高，同時(shí)操作更加便捷。
檢測(cè)步驟
HIV-p24 ELISA Kit 通過裂解液將慢病毒顆粒中的p24蛋白釋放出來，然后與酶標(biāo)板上的預(yù)包被p24抗體結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合物，加入生物素標(biāo)記的p24檢測(cè)抗體，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)，形成“包被抗體- HIV-p24蛋白-檢測(cè)抗體-Streptavidin-HRP”免疫復(fù)合物，通過顯色底物TMB顏色反應(yīng)的深淺指示樣本中HIV-p24的濃度。
標(biāo)準(zhǔn)曲線OD值示例
標(biāo)準(zhǔn)曲線
以標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對(duì)應(yīng)OD值進(jìn)行四參數(shù)擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線可知，TransGen 產(chǎn)品指標(biāo)良好。
