支原體污染解決方案
支原體是一種類似細菌但不具有細胞壁的原核微生物,直徑在 50-300 nm,可輕松通過一般濾膜(0.22 μm)混入培養(yǎng)系統(tǒng)中,普通的抗生素(如培養(yǎng)細胞常用的雙抗)對它不起作用。支原體以寄生和共生方式存活,部分可能導致動物、植物宿主的病變。
支原體是細胞污染物中比較常見的一種,來源廣泛,常見的主要來自培養(yǎng)試劑、人員操作、細胞間交叉污染及組織來源。受支原體污染的細胞生長會變慢,狀態(tài)會變差,雖不會馬上使細胞致死,但卻會影響細胞內的各種參數,如改變細胞膜抗原性,改變細胞新陳代謝,干擾核酸的合成,改變 DNA 轉染效率,導致染色體畸變等,這些影響會造成實驗結果不準確,重復性差,甚至得出錯誤的結論。2013年業(yè)界頂級期刊《Nature》已正式要求投稿的文章如涉及細胞培養(yǎng),都必須要進行支原體檢測。此外,支原體污染檢測也是生物藥研發(fā)與生產的重要質控指標,必須在生物藥產品開發(fā)的各個階段進行,包括原材料、細胞庫、病毒種子庫、未加工的收獲液材料和最終產品。
常見的支原體檢測方法
支原體不僅僅會影響細胞狀態(tài),在實驗過程中受污染的支原體會成為感染源可以感染其它細胞,因此支原體的去除與預防也至關重要。全式金推出快速、高效的支原體檢測試劑,高去除率、低毒性的去除試劑及使用方便、可替代雙抗的預防試劑,全方位助力消除支原體污染。
支原體檢測
TransDetect? PCR Mycoplasma Detection Kit
本產品通過 PCR 方法檢測培養(yǎng)細胞等生物材料中的支原體,針對支原體 16S rRNA 序列保守區(qū)域設計特異引物,直接使用細胞培養(yǎng)液作為模板,特異性擴增支原體 DNA,具有操作簡便、快速(2 小時內即可出結果)、 特異性強、靈敏度高的特點。
? 靈敏度高,可檢測到低至 20 個拷貝的支原體 DNA。
? 特異性強,只擴增支原體 DNA,真核細胞和細菌 DNA 不被擴增。
? 操作簡便,無需提取基因組 DNA,適合大量細胞樣品的檢測。
? 配有陽性對照與陰性對照,保證 PCR 檢測結果的準確性。
TransDetect? Luciferase Mycoplasma Detection Kit
本產品利用支原體中所特有的酶設計而成,該酶分解 MycoDetect Substrate 的同時將 ADP 轉換成ATP,熒光素酶在 ATP 存在的條件下催化熒光素(luciferin)氧化發(fā)出生物熒光,通過檢測生物熒光可 以表征細胞培養(yǎng)物是否存在支原體污染。由于檢測的是真正具有生物活性的支原體,所以得到的結果 比 PCR 檢測方法更加準確。該方法靈敏度高、操作簡便、省時。
靈敏度高,可檢測高倍稀釋的陽性樣本
結果判斷準確率高
TransDetect? qPCR Mycoplasma Detection Kit
本產品采用TaqMan實時熒光定量PCR法檢測支原體DNA,用于定性檢測如培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)物、生物制品等樣品中的支原體污染??蓹z測的支原體種類涵蓋范圍廣,包括柔膜菌綱(Mollicutes)下的多種支原體(Mycoplasma spp.)、無膽甾原體(Acholeplasma spp.)、螺原體(Spiroplasma spp.)等。本試劑盒按照EP 2.6.7和JP G3支原體檢測相關指南和要求進行驗證。? 支原體種類覆蓋范圍廣:已驗證13 株菌株及質粒DNA 的支原體檢測,數據庫比對可覆蓋至少129 種支原體DNA 序列。
? 靈敏度高:驗證的支原體滿足95% 的檢出要求,檢測限可達10 CFU/mL;質粒標準品可達1 copy/μL。
? 特異性高:常見的近20 種細菌、生產用細胞等基因組無檢測干擾。
? 穩(wěn)定性高:產品至少可凍融15 次,產品性能無明顯影響。
? dUTP/UDG 防污染系統(tǒng):有效防止PCR 產物的污染,數據準確。
? 儀器兼容性廣:主流qPCR 檢測儀器均可兼容,檢測結果一致。
靈敏度高
10 種10 CFU/mL 支原體標準株DNA 的擴增結果顯示,TransGen 產品在檢出限10 CFU/mL 濃度下,檢出率可達到100%。(擴增圖是發(fā)酵支原體標準品檢測結果展示)
特異性高
以上物種基因組DNA 的擴增結果均為陰性,表明TransGen 產品特異性高,與非支原體物種無交叉反應。
支原體去除
TransSafeTM Mycoplasma Elimination Reagent (TransMyco Plus) Kit
本產品包含兩類抗生素組分,第一類抗生素干擾支原體的蛋白表達,第二類抗生素干擾支原體的 DNA復制,從而可以有效去除支原體污染。本產品對真核細胞干擾小,細胞毒性低,可以保持較高的細胞活率。
? 支原體清除效率高。
? 使用濃度低,細胞毒性小,適用細胞種類廣。
? 使用方便,直接加入培養(yǎng)基中即可。
支原體預防
TransSafeTM?Mycoplasma Prevention Reagent
本產品是對支原體具有抑制作用的三種抗生素的混合物,分別為大環(huán)內酯類、四環(huán)素類和氟喹諾酮類衍生物抗生素,可以有效干擾支原體的蛋白表達和DNA復制。
? 支原體預防效果好,可以最大程度地避免支原體污染。
? 使用濃度低,細胞毒性小,適用細胞種類廣。
? 使用方便,直接加入培養(yǎng)基中即可。
? 抗性范圍廣,可替代雙抗預防常見的革蘭氏陰性和陽性菌。
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